Medios de cultivo cromogénicos para el diagnóstico de patógenos específicos.

Elaboró: Juan Fernando Londoño Arenas. Esp. Microbiología clínica. 24 de noviembre de 2022. Email: gerencia@newmente.com

En 1979 el Dr. Alain Rambach inventó y patentó los medios de cultivo cromogénicos. Desde hace aproximadamente 20 años se usan y aún continúan vigentes, tanto en la microbiología clínica además de la microbiología industrial. Su desarrollo ha sido enorme, contando actualmente con medios parta la detección específica de Clostridium difficile, Campylobacter spp, Yersinia enterocolitica, entre otros. Además de otros medios para tamizaje de bacterias con resistencia bacteriana como Enterococos resistentes a vancomicina o Acinetobacter resistentes a carbapenemasas.

Un medio cromogénico utiliza substratos enzimáticos cromogénicos dirigidos específicamente a especies o grupos de especies de acuerdo con su actividad enzimática. Esta actividad no es cien por ciento específica por lo que se requieren sustratos adicionales y/o agentes selectivos complementarios; por esto la mayoría de los medios cromogénicos son selectivos y diferenciales.

Medios de cultivo cromogénicos para la detección de patógenos específicos

Candida spp: Incorpora 2 sustratos cromogénicos para la detección de la actividad B-hexosaminidasa y actividad fosfatasa. Permite la identificación específica de Candida albicans/dubliniensis que forman colonias verdes por la producción de B-hexosaminidasa, y de Candida tropicalis que forma colonias azules debido a la producción de ambas enzimas. Otras especies que solo producen actividad fosfatasa pueden aparecer de color rosa, las demás que no poseen ninguna actividad de las enzimas crecen de color blanco. En los últimos años se han mejorado algunos medios que permiten también la diferenciación de Candida auris.

Pseudomonas aeruginosa: P. aeruginosa cuenta con actividad peptidasa aprovechada por el sustrato B-alanil pentilresorufamina para formar colonias moradas. Este medio es muy útil para detectar este patógeno, especialmente en poblaciones con alta probabilidad de aislamiento como los pacientes con fibrosis quística, donde se ha demostrado un valor predictivo positivo (VPP) de hasta el 98.3%.

Staphylococcus aureus: el medio de cultivo utiliza el sustrato fosfatasa para detectar S. aureus como colonias rosadas. Otros se basan en la producción de α-glucosidasa por parte de S. aureus para formar colonias verdes.

Streptococcus agalactiae (SAG): el medio permite la detección de SAG como colonias rojas por la producción de fosfatasa. Presentan mayor sensibilidad y especificidad comparados con agar sangre y agar CNA.

Uropatógenos: gracias a la β-glucoronidasa se pueden identificar Escherichica coli, KlebsiellaEnterobacterSerratia (KES); la inclusión de triptófano y sales de hierro permite a Proteeae (ProteusProvidenciaMorganella) formar colonias cafés. Otros medios integran β-galactosidasa que permite hasta en un 99% identificar a E. coli con respecto a β-glucoronidasa con el 94%. Otra proporción de Citrobacter spp. puede crecer con color rosado de E. coli por lo cual se aconseja el uso de la prueba de indol, siendo positiva para E. coli.

Medios de cultivo cromogénicos para la detección de patógenos entéricos

Clostridium difficile: El aislamiento de C. difficile junto con la demostración de la toxina o genes de toxina son el gold estándar para el diagnóstico de infección por esta bacteria. C. difficile generar colonias negras debido a la expresión de la actividad de β-glucosidasa que da como resultado la hidrólisis de un sustrato cromogénico. Las colonias requieren confirmación de su identificación.

Campylobacter spp: El sustrato cromogénico usado en el medio no ha sido revelado por el fabricante.

Salmonella spp: Los cromogénicos para esta bacteria ofrecen la misma sensibilidad del agar XLD y Hektoen. Se requiere igualmente el enriquecimiento previo en caldo selenito. La ventaja es que ofrecen una mayor especificidad, lo que se traduce en menos pruebas confirmatorias y mayor ahorro en costos para el laboratorio.

Shigella spp: en el mercado solo hay un medio de cultivo desarrollado y faltan más estudios para demostrar su ventaja frente a los medios tradicionales.

  1. coli productora de toxina shiga: Se plantea como ventaja frente al tradicional agar MacConkey sorbitol porque cada vez aparecen más serotipos de E. coli 0157:H7 que están fermentando el sorbitol. Perdiendo por tanto especificidad dicho medio ya que fue diseñado para serotipos que en su mayoría eran no fementadores de este azúcar. Los cromogénicos no presentan mayor especificidad y sensibilidad frente a los métodos tradicionales, a no ser que sean usados para aislar E. coli 0157:H7 desde muestras positivas por PCR por ejemplo.

Vibrio spp: Sus sustratos cromogénicos no ha n sido revelados. Los medios desarrollados permiten el aislamiento y diferenciación de las dos especies más importantes: Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus. Aunque se requieren más estudios hasta la fecha presenta mayor especificidad (100%) versus agar TCBS (50%).

Yersinia enterocolitica: Sus sustratos cromogénicos no han sido revelados. Se requieren más estudios al respecto.

 

En próximos blogs conocerás los medios de cultivo cromogénicos para la detección de bacterias resistentes a antimicrobianos y su panorama en una era de diagnóstico molecular.

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